什么是磁珠?
磁珠由微小的氧化铁颗粒(20至30nm)组成,例如磁铁矿(Fe3O4),它们具有超顺磁性。超顺磁珠与常见的铁磁体不同,因为它们仅在存在外部磁场的情况下才会表现出磁性。该性质取决于珠粒中颗粒的尺寸,并使珠粒及其结合的任何物质都能悬浮分离。由于它们不会在磁场之外相互吸引,因此可以使用它们而无需担心不必要的结块。
有许多类型的磁珠可用。不同的表面涂层和化学性质赋予每种类型的珠子自己的结合特性,这些特性可以轻松,有效和可扩展的方式用于核酸,蛋白质或其他生物分子的磁分离(分离和纯化)。
这种易用性使其易于自动化,并且非常适合一系列应用,包括用于下一代测序(NGS)和PCR的样品制备,蛋白质纯化,分子和免疫诊断,甚至是磁活化细胞分选(MACS)等。
什么是磁分离?
磁分离使用磁场从悬浮液中分离出微米级的顺磁性颗粒。在分子生物学中,磁珠提供了一种简单可靠的方法来纯化各种类型的生物分子,包括基因组DNA,质粒,线粒体DNA,RNA和蛋白质。使用磁珠的主要优势在于,可以直接从粗制样品以及各种不同类型的样品中分离核酸和其他生物分子。
磁珠DNA提取如何工作?
磁珠已经存在了数十年。如年美国专利所证明的,它们在核酸纯化中的潜力得到了认可。
结合DNA后,外部磁场将磁珠吸引到管的外边缘,从而将其固定。当固定珠子时,珠子结合的DNA在洗涤步骤中被保留。加入洗脱缓冲液,并去除磁场,然后释放出DNA,成为纯化样品,准备进行定量和分析。
这种方法消除了对真空或离心的需要,该方法使目标分子上的剪切力最小化,比其他DNA提取方案所需的步骤和试剂更少,并且适用于24、96和孔板的自动化。
因此,难怪磁性珠越来越受欢迎。实际上,制造商现在已经开发了许多基于磁珠的商业核酸分离试剂盒。它们具有各种表面化学和多种应用的选择。
磁珠表面化学性质和应用的比较
类型结合方式应用领域羧酸修饰的磁珠可与核酸结合直接捕获。
适合通过共价键结合的表面。
可以捕获含有氨基的分子。
共价连接
亲和纯化
核酸分离纯化
NGS
防胺磁珠适合通过共价键结合的表面。
非表面活性剂,非蛋白质阻塞的表面。
低的非特异性结合。
共轭应用,类似于羧酸酯修饰的珠子。Oligo(dT)涂层磁珠与mRNApoly-A尾巴杂交。
胶体稳定性高。
mRNA提取与纯化
逆转录PCR
cDNA文库构建
NGS(RNA测序)
链霉亲和素包被的磁珠结合生物素化的配体,例如蛋白质,核酸和肽。
共价结合的链霉亲和素涂层。
快速的反应动力学。
低的非特异性结合。
高通量和精度。
用于基因组学和蛋白质组学的样品制备和测定开发。
链霉亲和素阻断的磁珠结合生物素化的配体,例如蛋白质,核酸和肽。
非表面活性剂,非蛋白质阻塞的表面。
与非链霉亲和素包被的珠相比,通过非特异性结合位点的额外阻断,非特异性结合更低。
分子和免疫诊断
NGS库准备
NeutrAvidin?涂层磁珠结合生物素化的配体,例如蛋白质,核酸和肽。
快速的反应动力学。
低的非特异性结合。
高通量和精度。
:用于基因组学和蛋白质组学的样品制备和测定开发。
蛋白质A/G磁珠结合IgA和IgG蛋白
基于IgA/IgG融合蛋白的涂层。
广泛的绑定功能。
亲和纯化和下拉
免疫沉淀
二氧化硅涂层的磁珠基于盐浓度可逆地结合核酸。
尺寸范围在μm或μm的单分散颗粒。
用于分子诊断应用(例如qPCR)的核酸提取。
琼脂糖磁珠广泛的配体选择。
多孔,比其他磁珠提供更大的表面积。
亲和纯化或捕获
免疫沉淀
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